日本干细胞：脂肪干细胞如何修复神经？

　　 脂肪干细胞及其来历细胞外基质构建的新式组织工程神经在周围神经批改中的使用。许多的研讨证明细胞外基质对调控细胞行为具有重要意义,无论是对干细胞仍是神经再生相关细胞,均可以促进其搬迁、增殖和分化。所以,关于周围神经而言,细胞外基质微环境可能对周围神经的再生具有杰出的促进作用。

　　脂肪干细胞可经过临床抽脂等获取,其来历相对广泛,被广泛用于组织工程与神经再生研讨,但研讨的注重点多放在它的分化才能、旁排泄作用上,而对其排泄的细胞源性细胞外基质研讨不多。

　　目的：本课题经过研讨脂肪干细胞促进神经再生的作用,进一步讨论脂肪干细胞来历细胞外基质微环境对神经再生的影响,并运用脂肪干细胞来历细胞外基质润饰生物材料支架并复合脂肪干细胞构建一种新式组织工程神经并点评其批改周围神经残损的作用。

　　方法：1.经过酶消化的方法培养原代脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),然后进行流式表面抗原的断定、三系诱导分化、CCK8法测定不同代ADSCs的增殖及向类雪旺细胞分化才能;2.ELISA法测定ADSCs条件培养基中神经再生相关因子的含量。

　　EdU法测定雪旺细胞在参与条件培养基和与ADSCs直接共培养后的增殖情况。

　　免疫荧光测定背根神经节神经元在参与条件培养基、与ADSCs直接共培养和直接共培养的轴突生长长度；3.制备ADSCs源性细胞外基质,用光镜和电镜断定其表面特征,免疫荧光断定其成分,体外点评其对雪旺细胞和背根神经节的作用；4.运用ADSCs源性细胞外基质润饰壳聚糖空管内表面并复合ADSCs构建组织工程神经,并将之植入到大鼠坐骨神经残损模型中,并从步态剖析、电生理点评、组织学点评和靶器官点评等方面点评其促进周围神经批改的作用。

　　5.比照血管基质细胞混合物(stromal vascular fraction.SVF)与ADSCs在大鼠坐骨神经残损批改中的作用。

　　作用：1.脂肪干细胞诱导的类雪旺细胞,S100、GFAP和p75免疫荧光染色阳性；2.在与ADSCs直接共培养环境下,直接共培养组的EdU阳性细胞与条件培养基一起,高于一般培养基,差异有统计学意义(P<0.01)；在与ADSCs直接共培养和直接共培养的环境下,直接共培养组的背根神经元轴突长度常于其它组,差异有统计学意义(P<0.01)；3.制备了ADSCs源性的细胞外基质,其表面的基质成分交织成网,高倍电镜下可见许多微孔样结构。

　　其成分含有许多的层粘连蛋白、纤连蛋白、Ⅰ和Ⅳ型胶原。

　　体外验证了ADSCs源性细胞外基质相同具有促进雪旺细胞增殖和背根神经节轴突生长的作用；4.构建的ADSCs源性细胞外基质润饰并复合ADSCs勺组织工程神经在体内促进了模型大鼠步态、复合肌肉动作电位、有髓神经纤维直径和髓鞘厚度及靶肌肉横截面肌纤维面积等方针的康复,作用优于ECM和ADSCs组,并挨近自体神经的医治作用；5.一与ADSCs比较,SVF也可使神经纤维直径和髓鞘厚度增加,并进步腓肠肌湿重康复率,两者之间差异没有统计学意义,可是高于空管组而低于自体神经,差异有统计学意义(P<0.05)。

　　定论：1.ADSCs可以向类雪旺细胞分化;2.ADSCs的旁排泄作用可促进雪旺细胞的增殖和背根神经元轴突的生长,在神经元轴突生长的过程中,细胞与神经元轴突的接触也发挥了重要的作用；3.ADSCs源性ECM在体外可促进雪旺细胞的增殖和背根神经节神经元轴突的生长,并可以引导雪旺细胞和轴突顺ECM的方向生长；4.构建的ADSCs源性细胞外基质并复合ADSCs的组织工程神经促进了SD大鼠坐骨神经功能和形状的康复,其作用挨近自体神经；5.SVF具有与ADSCs相似的促进SD大鼠坐骨神经再生的作用,可以作为代替ADSCs的种子细胞运用。

　　脂肪干细胞及其来历细胞外基质构建的新式组织工程神经在周围神经批改中的使用

　　关于临床中大段神经残损,目前商用的神经移植物难以获得满足的批改作用。

　　许多的研讨证明细胞外基质对调控细胞行为具有重要意义,无论是对干细胞仍是神经再生相关细胞,均可以促进其搬迁、增殖和分化。

　　所以,关于周围神经而言,细胞外基质微环境可能对周围神经的再生具有杰出的促进作用。

　　脂肪干细胞可经过临床抽脂等获取,其来历相对广泛,被广泛用于组织工程与神经再生研讨,但研讨的注重点多放在它的分化才能、旁排泄作用上,而对其排泄的细胞源性细胞外基质研讨不多。

　　目的：本课题经过研讨脂肪干细胞促进神经再生的作用,进一步讨论脂肪干细胞来历细胞外基质微环境对神经再生的影响,并运用脂肪干细胞来历细胞外基质润饰生物材料支架并复合脂肪干细胞构建一种新式组织工程神经并点评其批改周围神经残损的作用。

　　方法：1.经过酶消化的方法培养原代脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),然后进行流式表面抗原的断定、三系诱导分化、CCK8法测定不同代ADSCs的增殖及向类雪旺细胞分化才能;2.ELISA法测定ADSCs条件培养基中神经再生相关因子的含量。

　　EdU法测定雪旺细胞在参与条件培养基和与ADSCs直接共培养后的增殖情况。

　　免疫荧光测定背根神经节神经元在参与条件培养基、与ADSCs直接共培养和直接共培养的轴突生长长度；3.制备ADSCs源性细胞外基质,用光镜和电镜断定其表面特征,免疫荧光断定其成分,体外点评其对雪旺细胞和背根神经节的作用；4.运用ADSCs源性细胞外基质润饰壳聚糖空管内表面并复合ADSCs构建组织工程神经,并将之植入到大鼠坐骨神经残损模型中,并从步态剖析、电生理点评、组织学点评和靶器官点评等方面点评其促进周围神经批改的作用。

　　5.比照血管基质细胞混合物(stromal vascular fraction.SVF)与ADSCs在大鼠坐骨神经残损批改中的作用。

　　作用：1.脂肪干细胞诱导的类雪旺细胞,S100、GFAP和p75免疫荧光染色阳性；2.在与ADSCs直接共培养环境下,直接共培养组的EdU阳性细胞与条件培养基一起,高于一般培养基,差异有统计学意义(P<0.01)；在与ADSCs直接共培养和直接共培养的环境下,直接共培养组的背根神经元轴突长度常于其它组,差异有统计学意义(P<0.01)；3.制备了ADSCs源性的细胞外基质,其表面的基质成分交织成网,高倍电镜下可见许多微孔样结构。

　　其成分含有许多的层粘连蛋白、纤连蛋白、Ⅰ和Ⅳ型胶原。

　　体外验证了ADSCs源性细胞外基质相同具有促进雪旺细胞增殖和背根神经节轴突生长的作用；4.构建的ADSCs源性细胞外基质润饰并复合ADSCs勺组织工程神经在体内促进了模型大鼠步态、复合肌肉动作电位、有髓神经纤维直径和髓鞘厚度及靶肌肉横截面肌纤维面积等方针的康复,作用优于ECM和ADSCs组,并挨近自体神经的医治作用；5.一与ADSCs比较,SVF也可使神经纤维直径和髓鞘厚度增加,并进步腓肠肌湿重康复率,两者之间差异没有统计学意义,可是高于空管组而低于自体神经,差异有统计学意义(P<0.05)。

　　定论：1.ADSCs可以向类雪旺细胞分化;2.ADSCs的旁排泄作用可促进雪旺细胞的增殖和背根神经元轴突的生长,在神经元轴突生长的过程中,细胞与神经元轴突的接触也发挥了重要的作用；3.ADSCs源性ECM在体外可促进雪旺细胞的增殖和背根神经节神经元轴突的生长,并可以引导雪旺细胞和轴突顺ECM的方向生长；4.构建的ADSCs源性细胞外基质并复合ADSCs的组织工程神经促进了SD大鼠坐骨神经功能和形状的康复,其作用挨近自体神经；5.SVF具有与ADSCs相似的促进SD大鼠坐骨神经再生的作用,可以作为代替ADSCs的种子细胞运用。

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